一、制備顯微標(biāo)本的切片法

　　這是*常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質(zhì)，將整塊組織加以包埋，*后凝固成均勻一致的固態(tài)結(jié)構(gòu)。用切片機(jī)制取*薄的切片。為了讓石蠟?zāi)芙虢M織內(nèi)部，需將組織經(jīng)過脫水等處理。過程大致如下：

　　⑴固定：生物標(biāo)本脫離機(jī)體或培養(yǎng)環(huán)境，細(xì)胞會(huì)發(fā)生自溶，腐敗分解。因此，需用固定劑處理，使蛋白質(zhì)凝固停止瀕死或死后變化。凡供******保存的標(biāo)本都需經(jīng)固定處理。

　　常用的固定劑是甲醛、乙醇等，能使蛋白質(zhì)凝固。還有由幾種試劑配成的固定液，例如Carnoy固定液，由無水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更強(qiáng)，不含水分，可避免水溶性物質(zhì)如糖原等在固定過程中損失。

　　⑵脫水：是將組織細(xì)胞所含水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），濃度遞升到100%。此過程還使組織塊進(jìn)一步硬化。

　　⑶透明：是用既能溶于純酒精又能融解石蠟的有機(jī)溶劑，將組織中的酒精取代，以便石蠟浸入。通常用二甲苯（xylene）為透明劑。

　　⑷浸蠟：在溫箱內(nèi)進(jìn)行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中，讓石蠟浸透組織，作為支持介質(zhì)。

　　⑸包埋：將已浸蠟的組織塊放入熱融的包埋石蠟中，迅速冷凝，組織決便被蠟包埋。

　　⑹切片：用切片機(jī)。常用的切片機(jī)有輪轉(zhuǎn)式、平推式的。用輪轉(zhuǎn)式的易于切出連續(xù)切片。切片厚度隨制片目的而調(diào)整。教學(xué)標(biāo)本厚度多是5~6μm。

　　⑺貼片烤干：石蠟切片在溫水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色處理。染色后用樹膠、蓋坡片封固，可******保存。

　　二冷凍切片法

　　冷凍切片法是借組織在低溫下，凍結(jié)變硬而達(dá)到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機(jī)，或在普通切片上配制冷設(shè)施。恒冷切片機(jī)是高級(jí)冷凍切片設(shè)備。它有一個(gè)恒冷箱，標(biāo)本致冷臺(tái)和切片機(jī)都裝在箱內(nèi)。恒冷箱的作用類似冰箱，可在一定范圍內(nèi)調(diào)整溫度，其結(jié)構(gòu)有利于保持箱內(nèi)恒定低溫，減少箱門打開時(shí)環(huán)境溫度的干擾。切片機(jī)的輪轉(zhuǎn)把手裝在箱外，便于操縱切片。

　　冷凍切片法的優(yōu)點(diǎn)是：在處理得當(dāng)時(shí)，它可以******限度地保持組織的新鮮狀態(tài)。并且，由于不需經(jīng)脫水、透明、浸蠟等過程中有機(jī)溶劑的處理，及濕箱浸蠟熱的影響，甚至可不經(jīng)固定。所以能很好地保存組織細(xì)胞的各種成分和酶的活性，因此在酶的組織化學(xué)研究中常用此切片法。

　　二、顯示標(biāo)本結(jié)構(gòu)成分的染色法

　　一蘇木素伊紅染色法（HE染色法）

　　為*常用的染色法。該法應(yīng)用于各種組織的染色，是組織學(xué)技術(shù)的基本方法，對(duì)任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用，只是對(duì)不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡介石蠟包埋切片的HE染色法。

　　1、脫蠟：石蠟切片的組織內(nèi)部充滿石蠟，不能使水溶性染液著色，因此在染色前必須*先用二甲苯將石蠟脫掉，共兩次。

　　2、下行入水：將已脫蠟的標(biāo)本浸入無水酒精及各級(jí)酒精，使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。

　　4、蘇木素溶液染色約5—15分鐘

　　5、自來水洗去多余染料。

　　6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色，邊分色邊鏡檢，至核呈紅紫色，細(xì)胞質(zhì)無

　　色為合適。

　　7、分色后用自來水或加數(shù)滴氨水堿化，直至細(xì)胞核變成藍(lán)色。這一步驟也可稱為“藍(lán)化”。

　　8、入蒸餾水洗去堿性水分。

　　9、入70%酒精→80%酒精各5分鐘。

　　10、入伊紅染液染色30秒至數(shù)分鐘。

　　11、以95%酒精對(duì)伊紅分色，至胞漿，結(jié)締組織等呈桃紅色。

　　12、上行脫水：染色后的切片，因組織內(nèi)含水而不透明，不能清晰地觀察其微細(xì)結(jié)構(gòu)。因此，須將組織內(nèi)的水分經(jīng)各級(jí)酒精→無水酒精逐步置換，*后進(jìn)入不含水份的透明劑內(nèi)。

　　13、透明：入二甲苯透明劑，二次（各數(shù)分鐘）。

　　結(jié)果：細(xì)胞核藍(lán)紫色，胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，彈性纖維呈明亮桃紅色。